覃文新:DKK1蛋白作为肝癌血液标志物的发现和转化研究
上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室
肝细胞癌是全球致死率较高的恶性肿瘤之一,及时有效的诊断可提高患者的临床治疗效果、延长生存时间。
本研究纳入两个队列:测试集和验证集,测试集共831例血清样本,验证集共453例血清样本。采用酶联免疫吸附实验测定DKK1在血清中的浓度,并根据受试者工作特征曲线分析其对肝细胞癌的诊断价值。
结果显示:DKK1蛋白在肝细胞癌患者组血清中的浓度明显高于非癌症组;血清DKK1蛋白对肝细胞癌总体诊断率可达69.1%,对早期肝细胞癌(BCLC 0+A)和小肝癌(单个小于2cm)的诊断率分别可达70.9%和58.5%;同时,DKK1蛋白能够弥补甲胎蛋白(AFP)对肝细胞癌诊断能力的不足,对甲胎蛋白阴性(≤20ng/ml)肝细胞癌的诊断率为70.4%,并可从甲胎蛋白阳性(>20ng/ml)的慢性乙型肝炎及肝硬化等高危患者中鉴别诊断肝细胞癌,鉴别诊断率达68.2%;DKK1蛋白与甲胎蛋白联合应用,可将肝细胞癌总体诊断率提高至87.5%。
验证集验证了血清DKK1蛋白对肝细胞癌的诊断价值,手术后患者血中的DKK1浓度迅速下降,血清DKK1蛋白亦可作为肝癌疗效监测和预后判断指标(The Lancet Oncology 2012 Aug; 13(8):817)。
姜非:糖基化蛋白质量特性的变更
糖基化蛋白的特性是拥有相同的氨基酸序列和不同的糖链构成。批次间差异、工艺参数的漂移和生产工艺的变更都可能影响蛋白药物的质量特性。可比性研究的结果决定了质量特性的变更是否能够被监管机构所接受。通过三个案例分析,阐述了可接受的质量特性变更。
贾立军:Neddylation蛋白修饰-CRL 泛素连接酶通路调控肿瘤细胞自噬应答的机制与潜在应用
贾立军博士,复旦大学附属肿瘤医院肿瘤研究所研究员和博士生导师。目前主要从事“针对蛋白质翻译后修饰通路进行抗肿瘤分子靶点发现”等研究工作。
相关研究在 J Natl Cancer Inst(JNCI)、Cancer Research、Clinical Cancer Research、Autophagy、Cell Death & Differentiation、Cell Death & Disease、Int J Cancer和J Biol Chem等学术期刊发表文章40篇、获邀参编英文专著4部。主持国家自然科学基金(81372196,31071204,30500637,81172092)、国家重大科学研究计划(2012CB910302,课题负责)、上海市卫生局A类重点项目 (2010012)、上海市“浦江人才 ”资助计划(12PJ1400600)和上海高校特聘教授(东方学者)资助计划等科研项目。
学术兼职包括:国家自然科学基金委员会医学科学领域学科评审组专家、中华医学科技奖评审委员会委员、上海市免疫学会肿瘤免疫专业委员会委员、高等学校自然科学奖和技术发明奖评审专家和十余种学术期刊审稿专家。荣获上海高校特聘教授(东方学者)和上海市浦江人才等荣誉称号。
粘着蛋白的发现和表征 - Mary Beckerle P2
本视频由科普中国和生物医学大讲堂出品
Mary Beckerle (University of Utah) Part 2: Discovery and Characterization
In the second segment, I describe the identification of the focal adhesion protein, zyxin, by my lab. Recent work revealed that zyxin is down-regulated upon expression of the Ewing sarcoma oncoprotein, EWS-FLI. Loss of zyxin expression results in enhanced cell motility and is also associated with failed apoptotic signaling. Evidence that zyxin shuttles between focal adhesions and the nucleus is presented. The impact of reduced zyxin expression on tumor progression is discussed. See more at http://www.ibiology.org
蛋白免疫印迹杂交
蛋白免疫印迹杂交用来鉴定电泳分离的样品中是否存在某特定蛋白。样品通过聚丙酰胺凝胶电泳,也称SDS-PAGE得到分离后,再通过凝胶转移将蛋白质从聚丙酰胺凝胶转移到一张膜上,这样可将蛋白质固定在其特定的分离位置。接下来,用抗体对膜进行杂交,这一过程称之为免疫杂交。免疫杂交是通过抗体与目标蛋白、以及抗体与抗体之间特定识别位点的结合来实现,它的高特异性使得可以鉴定单一蛋白。对抗体的识别则用含酶的报告系统来完成。酶结合在抗体的末端,与底物起反应产生颜色或者光的变化。这些信号会被捕捉成像,并可用光密度计量学对其进行定量。
本视频文章将通过讲解凝胶转移,抗体识别和图像分析来全面介绍蛋白免疫印迹技术。将重点讨论凝胶转移步骤中的关于如何搭建转移三明治和凝胶转移条件、以及抗体结合与抗体识别的基本原理。我们还将举例说明该技术的广泛应用,包括检测蛋白质之间的相互作用和在蛋白复合物中鉴定单个蛋白。
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用SDS-PAGE技术分离蛋白
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳,也称SDS-PAGE,是一种被广泛使用,仅根据分子量大小来分离蛋白质混合物的技术。阴离子去污剂SDS,在变性的线性蛋白表面沿长度均匀分布使其带电。将它们上样到聚丙烯酰胺凝胶后,施加电压,这些表面覆盖SDS的蛋白将被分开。电场作为驱动力,牵引SDS结合的蛋白朝阳极移动,分子量大的蛋白将比小的蛋白移动慢。为了判断蛋白的大小,已知分子量大小的蛋白质标准也会和样品一起上样并在同等条件下跑胶。
本短片介绍SDS-PAGE技术,首先将解释其背后的原理,然后演示每一步的操作过程。视频还将讨论实验中的各种参数,如聚丙烯酰胺浓度,和用于跑胶的电压。还会介绍电泳之后的考马斯亮蓝和银染色方法,以及其他电泳技术,如双向凝胶电泳。
微管蛋白的发现
More than 40 years after Gary Borisy was a graduate student in Ed Taylor's lab, they reminisce about the events that led to the discovery of tubulin, the protein building block of microtubules. Entertainingly, their recollections don't always match.
未折叠蛋白反应的发现
Proteins that are secreted from the cell or inserted into the plasma membrane, transit through the endoplasmic reticulum where they are properly folded and assembled and may undergo post-translational modification. Walter tells the story of the exciting discovery made in his lab of the "unfolded protein response", a feedback pathway that ensures that the cell makes enough ER to properly modify all the secreted proteins in the cell.