免疫组化-斑马鱼标本的制作
斑马鱼由于具有饲育容易、胚胎透明、体外受精、突变种多、遗传学工具成熟等优点，近年来已成为研究脊椎动物发育与人类遗传疾病的新兴模式动物。该视频教您如何正确收集斑马鱼的卵及制作免疫组化所需的斑马鱼样本。
出水的鱼
大约40亿年前，鱼离开水并开始进化成陆地生物。但是这些转变是如何发生的？一项新的不同寻常的实验揭示了能让鱼鳞变化为四肢的可能。研究者拿到一种被认知可以驯化得用鱼鳞行走的物种，在陆地上生活，看看它散步吧……
为何我们应该关注鲸鱼粪便
海洋生物学家阿莎·德沃斯认为，鲸鱼有一项重要而令人惊奇的任务。它们是生态系统的工程师，保障海洋的健康和稳定，而它们完成该职责的方式之一却是——排泄粪便。阿莎·德沃斯是一名TED Fellow，请听她讲述鲸鱼这一被低估的，却能帮助保持海洋，乃至我们地球稳定和健康的行为。
印度斑马鱼：斑马鱼的介绍
印度斑马鱼是一种小型淡水鱼类，用作生物医学研究中的模式生物。这种鱼类的优点包括它们和人类基因高度保守的相似，以及它们的维护简单、低廉。另外，基因表达在斑马鱼的胚胎中很容易控制，而且它们的透明体征允许我们观察它们的发育过程。
在介绍斑马鱼的优点之前，本视频将首先介绍斑马鱼的基本生物学，包括系统发育、生命周期以及自然环境。本视频还将概述斑马鱼的研究历史，将回顾其中的主要发现，包括从早期建立有效的遗传学筛选方法到为人类疾病发现新型的治疗方法，例如癌症。最后，还将讨论许多斑马鱼实验中的一些，包括免疫学和发育学方面的研究。
斑马鱼的保存和饲养
斑马鱼是一种功能强大的脊椎动物模型，它用于研究发育过程、建立疾病模型和筛选新的药物。由于它们的个体小，可以在实验室内低成本地饲养大量的斑马鱼。尽管斑马鱼的保存相对容易，但为了使它们的健康和繁殖成功率达到最佳，仍需要特别注意其食物和水质。
本短片概述了斑马鱼在实验室的饲养和保存。在简单介绍斑马鱼的自然习性之后，将讨论如何在实验室中再建这种环境的关键技术，包括养鱼设施的水循环系统和准备丰年虾作为斑马鱼的部分食物。另外，本教学片还包含了在实验室如何记录特殊的斑马鱼品系的内容，主要提到了收集斑马鱼尾鳍进行DNA提取和基因型鉴定。最后还将讨论对斑马鱼的生活环境进行实验条件变动，以此来深入了解这些鱼类，进而了解我们自己。
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斑马鱼的繁殖和发育
斑马鱼已经成为研究遗传学和发育生物学的常用模型。斑马鱼的身体是透明的，这使得它们在发育的早期阶段能够在细胞水平直接观察到组织的形态发生。而且，斑马鱼很容易进行基因操作，这使得研究者能够在研究和人类的基因相似度极高的脊椎动物的发育过程中决定基因表达的效果。
本视频对斑马鱼发育的主要阶段提供了简单的概述，并集中讨论在受精后的前24小时。该讨论将从由一个细胞构成的接合子或者卵裂球开始，它位于卵黄球的顶端。卵裂球的分裂将产生胚胎，它将在几个小时内含有成千上万个细胞。下一步将解释通过神奇的细胞移动产生外包而形成原肠胚，然后再揭示它们是如何将大量的细胞改造并进入一个移动的胚胎，在仅仅一天内形成一个跳动的心脏。我们还将介绍胚胎发育的孵化期，在这个阶段，它们会成为能够游泳和捕食的幼虫。中间还会插入照顾斑马鱼幼虫的重要提示，包括如何将斑马鱼在指定的设备中培养到成年，该设备也称保育室。最后，本视频将会介绍几种常用的用于研究胚胎发育的技术，来阐述斑马鱼是如何帮助我们更好的理解人类的发育和疾病。
斑马鱼育种和胚胎的操作
斑马鱼是一种重要的模式生物。它对发育生物学的研究特别有用。首先，斑马鱼多产，每星期能产生几百个后代，因此，很容易收集到大量的胚胎用于高样本数研究。其次，斑马鱼发育速度快，而且胚胎透明，这使得我们能方便观测发育进程。
本短片展示了收集新受精斑马鱼胚胎的步骤。我们首先简单回顾了斑马鱼的交配行为，然后我们介绍了在特殊的实验室繁育鱼缸内建立杂交系。这种鱼缸可以让我们控制斑马鱼的交配。同时我们还说明了设置好鱼缸后在早上激发排卵（也叫大量排卵）的条件。接下来我们介绍了胚胎操作的关键技术，包括用化学物质PTU和脱氯作用抑制色素的产生以及去除包围胚胎的壳样的膜（卵壳）。最后，我们还介绍了这些技术在发育生物学研究中的实际应用。
斑马鱼显微注射技术
采用斑马鱼做为模型的一个突出优点是对它们进行遗传操作非常方便，对它们的早期胚胎进行显微注射即可。通过这种技术，含有遗传物质或者沉默表达框架的的溶液会被注入囊胚细胞：它们是位于新受精卵卵黄上方的胚胎细胞。将遗传物质导入细胞质一般是通过直接注射囊胚细胞，或者先注入卵黄再通过细胞质的自然流动导入囊胚细胞。成功的遗传学操作会带来一定数量的胚胎表型，用于阐明其发育的遗传学机制。
本短片介绍了斑马鱼胚胎的显微注射。我们将先回顾该技术的基本工具，包括注射装置和显微注射器，它可以通过空气压力脉冲来控制液体的流动。然后会阐述重要的准备工作，例如灌制琼脂板，用以在注射过程中稳定胚胎，以及校正显微注射装置。接下来我们会展示显微注射过程包括什么时候在什么部位注射等实验技巧。最后，我们会讨论显微注射技术的应用，包括通过mRNA注射获得基因过量表达，通过注射反义吗啉环寡核苷酸来沉默基因，以及利于经过特殊基因工程操作的质粒DNA产生转基因斑马鱼。
如何在斑马鱼完整胚胎样本中使用RNAscope®技术进行研究
整胚原位杂交是在完整胚胎和组织中研究基因时空表达模式的有力工具。但现有的实验方法无法准确的直接检测RNA，而且操作耗时，结果和蛋白表达水平不一致。新一代原位定量杂交技术RNAscope®可以在斑马鱼整胚上实现快速高效、精准定量、特异性的多重RNA原位检测。该webinar由美国ACD公司(Advanced Cell Diagnostics, Inc., California, USA)邀请德国Münster大学细胞生物学研究所Erez Raz教授实验室两位研究员Azadeh Paksa 和 Theresa Gros介绍他们利用RNAscope®技术实现斑马鱼整胚上同时原位检测3个RNA分子进行三维荧光分析。详细介绍了实验操作过程，如何优化条件，降低信噪比以及RNAscope®技术相比传统原位杂交技术的绝对优势。
ACD公司提供RNAscope®原位定量杂交专利技术和产品，详细信息请访问ACD官网www.acdbio.com。更多中文资料请关注中国官方微信号（ACD_China）咨询。
文章题目: Simultaneous high-resolution detection of multiple transcripts combined with localization of proteins in whole-mount embryos. Gross-Thebing T, Paksa A, Raz E. BMC Biol. 2014 Aug 15;12(1):55.