基本的组织培养:细胞传代
生物医学实验中常常会用到细胞系,因为它们可以快速生长和扩增提供实验分析要用到的细胞。细胞系与新分离的或原代细胞的培养条件相类似,但也有一些基本不同的地方:(1)每个细胞系需要其特定的生长因子混合物(2)与原代细胞相比,它们的生长需要更严密的监测,因为使它们无限生长的突变同时也会造成它们很快达到过度生长。因此,当细胞系生长到了几乎覆盖整个培养器皿底部,也就是90%的密度时,细胞需要重悬洗涤用于实验或冻存以备将来使用,或者重新接种到新的培养器皿进一步扩增。
本短片将演示如何使用培养液指示剂来判断细胞培养的健康程度,安全转移贴壁细胞所需要的试剂和仪器,并将讨论转移这些快速增殖的细胞到新培养液中的不同方法。还将同时演示如何培养饲养细胞(这对提供细胞必需的生长于因子很重要)和如何大规模培养细胞系的方法。
神经组织的组织学染色
为了检测组织和器官中的细胞,结构和分子的布局,研究人员使用一种被称为组织学染色的方法。在该技术中,感兴趣的组织被用化学固定剂保存并切片,或切成非常薄的切片。然后应用各种染色技术为这些看起来均一的切片提供对比度。在神经解剖学的研究中,组织学技术被经常用来观察和研究神经系统组织。
这段视频着重于神经组织的组织学染色技术。概述了常见的大脑组织染色,包括那些特异性标记神经元细胞体的方法,如尼氏染色,和那些有选择地突出显示髓鞘化的轴突的方法,如罗克沙尔固蓝染色。还讨论了免疫组化技术,该技术利用抗体和特定细胞蛋白之间的特异性相互作用。接下来,描述了制备用于染色的脑组织样品,包括固定,包埋,切片和复水组织的基本步骤。本短片还提供了免疫组织染色后进行尼氏染色的逐步过程,以及这些技术的实际应用。
神经组织的外值体培养
脊椎动物神经系统的精细结构产生于一系列涉及细胞分化,细胞迁移和细胞形态变化的复杂事件。研究这些过程对于我们了解神经系统功能,诊断和治疗发育异常导致的疾病极为重要。然而,神经组织相对无法得到实验处理,尤其是在哺乳动物的胚胎内。因此,许多科学家利用外植体培养,来在"器官型培养"的环境下研究神经发育过程,也就是将组织从生物体中取出,但仍保留其复杂的细胞结构。概括地说,获得外植体培养物就是仔细分离出神经组织,然后将其浸没在精心设计的生长培养基中,进行体外培养。
本短片将首先简要介绍神经外植体培养,包括它与其他体外方法相比的优势,和维持健康组织的重要考虑因素。接着,提供了一个从胚胎小鼠大脑建立起外植体培养的通用方法,概述从母体上分离胚胎和解剖大脑过程。本短片还包括了薄片培养的介绍,用该方法得到的神经系统的薄切片使得能更容易地观察发育中的细胞。最后,将演示这些技术的一些应用以说明它们是如何被用来回答神经发育领域的重要问题的。
徐铭恩:3D打印功能性“器官组织”用于个性化药物筛选
生物3D打印设计生命科学、医学、制造、材料等学科,需要具备系统技术基础,医工合作、相互支持,才能推动这一全新技术的转化
欧阳高亮:组织微环境与肿瘤转移
介绍了组织微环境的相关概念,相关模型概念。介绍了肿瘤转移相关生物学机制,信号通路,肿瘤干细胞等。介绍了POST与乳腺癌微环境的相关问题。
非酒精性脂肪性肝炎动物模型的药理学评价:组织病理和生物标记物
非酒精性脂肪性肝炎NASH是非酒精性脂肪肝的一种极端形式,其特征为肝脂肪导致的小叶炎症并随肝细胞损伤,进而引起肝脏纤维化,最终导致肝硬化以致肝细胞癌。其病理生理学发病原因是与最初肝细胞内脂质堆积有关,在联合第二个打击因素(有待进一步阐明)的刺激后,引发炎症和纤维化。目前在美国,非酒精性脂肪肝的发生概率在10-14%之间,而这其中会有10-30%的病人会转变为非酒精性脂肪性肝炎。目前在中国,非酒精性脂肪肝已经超过慢性病毒性肝炎,成为排名第一的肝脏疾病。临床诊断NASH的金标准则是肝组织活检和组织病理学评价。已经明确的NASH肝脏组织病理学特点包括脂肪变性、炎症、肝细胞凋亡和纤维化。用于估评研发药物体内药效的NASH动物模型应重现该疾病的二次击打病理生理学,及关键的组织病理特征。然而现有的脂肪肝及/或肝纤维化动物模型并不能完全满足人类NASH的病因学及/或组织病理学要求。 我们建立并验证了一个NASH动物小鼠模型,在该模型中,先以高脂饲料(HFD)诱导动物肥胖,然后用四氯化碳(CCL4)诱导纤维化,模拟人类NASH的二次打击。该模型动物产生明显肝脂肪变性,炎症反应,细胞凋亡(又叫肝细胞气球样变)及纤维化,所有这些病理变化都可以用人类NASH诊断标准作定量评价,并都吻合NASH的指标。我们已经确认纤维化、气球样变、炎症(在某种程度上)是高脂饲料和四氯化碳双重作用的结果,进一步说明了其与人类NASH病理的机制相似性。这一点与单纯HFD诱导的脂肪肝炎或CCL4诱导的肝纤维化及肝损伤形成鲜明对比。我们的模型已经用目前处于临床三期的INT-747(奥贝胆酸)作了充分的药效验证。INT-747的机制已经用生物标记物做了进一步的研究,即通过对该药的作用机制(MOA)相关的关键基因表达的定量。该模型已经用于测试其它NASH治疗药物,类似的生物标记物研究也验证各自的MOA。此外,我们也将该模型与作过比较。 这次我们邀请了药明康德生物部高级主任徐德鸣博士与大家进行在线交流,直接介绍有关的动物模型及动物实验的设计,分享该模型在测定新型治疗NASH化合物体内药效中的应用,比较用于NASH治疗药物的其它动物模型,对各类模型的特点进行对照。我们在研讨会最后设置了互动环节,如果您有任何问题,可以直接与徐博士及他的团队进行现场讨论。
RNAscope原位杂交技术对复杂组织进行空间表达分析
RNAscope和BaseScope原位杂交(ISH)广泛应用于人类样本库和临床科研以及临床前动物模型等组织中的高分辨率目标RNA表达分析。ACD的RNA-ISH检测在临床实验研究中是有效的,能够在复杂的组织微环境中进行定量的、细胞特异性的表达分析。 RNAscope和相关ISH技术的应用进展包括: - 固定组织中RNA的单分子检测 - 空间、多重RNA-ISH用于RNAseq转录组学的验证 - SARS-CoV-2及其他病毒病原体检测 - 实体瘤组织中CAR-T细胞的检测 - AAV基因治疗的生物分布