酵母双杂交原理
酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。典型的真核生长转录因子, 如GAL4、GCN4等都含有两个不同的结构域:DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列, 并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游, 转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用, 启动它所调节的基因的转录。
蛋白免疫印迹杂交
蛋白免疫印迹杂交用来鉴定电泳分离的样品中是否存在某特定蛋白。样品通过聚丙酰胺凝胶电泳,也称SDS-PAGE得到分离后,再通过凝胶转移将蛋白质从聚丙酰胺凝胶转移到一张膜上,这样可将蛋白质固定在其特定的分离位置。接下来,用抗体对膜进行杂交,这一过程称之为免疫杂交。免疫杂交是通过抗体与目标蛋白、以及抗体与抗体之间特定识别位点的结合来实现,它的高特异性使得可以鉴定单一蛋白。对抗体的识别则用含酶的报告系统来完成。酶结合在抗体的末端,与底物起反应产生颜色或者光的变化。这些信号会被捕捉成像,并可用光密度计量学对其进行定量。
本视频文章将通过讲解凝胶转移,抗体识别和图像分析来全面介绍蛋白免疫印迹技术。将重点讨论凝胶转移步骤中的关于如何搭建转移三明治和凝胶转移条件、以及抗体结合与抗体识别的基本原理。我们还将举例说明该技术的广泛应用,包括检测蛋白质之间的相互作用和在蛋白复合物中鉴定单个蛋白。
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RNAscope原位杂交技术助力新冠病毒检测及初步结果展示
RNAscope原位杂交技术助理新冠病毒检测及初步结果展示 1. RNAscope技术原理介绍 2. 在Zika,MERs-Cov,HIV等病毒研究中的应用实例 3. RNAscope应对新冠病毒研究的相关产品及结果展示
荧光原位杂交和染色体核型分析
A video protocol and description of Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) in plants. The following two companion resources contain recipes, probe plasmid data, and other information needed for doing the procedures illustrated in this video. Of further interest are suggestions for developing a karyotyping cocktail for other plant species and making probes from BAC DNA.
使用RNAscope原位杂交检测神经系统中的G蛋白偶联受体GPCRs
该视频由美国Advanced Cell Diagnostics公司的应用科学家讲解如何将RNAscope®技术应用于神经生物学研究。确切地对中枢神经系统某个区域的结构及其功能进行研究,原位检测是必不可少的。分泌型蛋白的脑内定位(例如神经营养因子),没有优质的组化抗体(如G蛋白偶联蛋白),蛋白含量较低且位于细胞核内不利于与抗体结合(例如转录因子),都是进行抗体实验的难题。然而,RNAscope®能够达到单个转录本、单个细胞水平的分辨率,同时检测多个靶标,具备稳定的多基因表达分析能力,并能够同时标记神经系统内不同细胞群,实现不同细胞型的可视化。本视频介绍了使用RNAscope对小鼠脑纹状体的FFPE组织样本检测GPCRs表达。 详细信息请访问ACD官网www.acdbio.com。更多中文资料请关注中国官方微信号(ACD_China)咨询。
RNAscope原位杂交技术对复杂组织进行空间表达分析
RNAscope和BaseScope原位杂交(ISH)广泛应用于人类样本库和临床科研以及临床前动物模型等组织中的高分辨率目标RNA表达分析。ACD的RNA-ISH检测在临床实验研究中是有效的,能够在复杂的组织微环境中进行定量的、细胞特异性的表达分析。 RNAscope和相关ISH技术的应用进展包括: - 固定组织中RNA的单分子检测 - 空间、多重RNA-ISH用于RNAseq转录组学的验证 - SARS-CoV-2及其他病毒病原体检测 - 实体瘤组织中CAR-T细胞的检测 - AAV基因治疗的生物分布